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  • 小型超声波清洗机的技术常识
  • 分子杂交的概念和基本原理
  • 分子杂交箱的使用注意事项
  • 分子杂交仪的产品特点
  • 分子杂交仪操作步骤及使用注意事项
  • 分子杂交概述
  • 分子杂交炉的应用范围
  • 怎样维修分子杂交仪
  • 分子杂交概述

    分子杂交仪又称分子杂交炉、分子杂交箱,是采用核酸分子杂交技术检测待测基因组中是否含有已知基因序列的设备。广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的检测和遗传病的基因诊断等方面。

    中文名 分子杂交仪 外文名 HybridizationOven


    概述

    分子杂交仪又称分子杂交炉、分子杂交箱,根据不同实验的需要可以选择不同的规格型号。它是现代实验室采用杂交技术的理想设备,可替代塑料杂交袋和水浴摇床,从而避免杂交袋破损带来的污染危险。杂交炉具有微机控温精确,炉内空气循环装置设计独特,升温速度快等特点。

    广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。


    分子杂交仪由箱体、杂交瓶转架或离心管转架、杂交管、摇床、隔膜、电脑控制系统等部件组成,不同型号的箱体容纳的管子数、微孔版数、载玻片数和平板数也不同。


    原理

    核酸分子杂交技术根据碱基互补配对原则,在一定条件下用标记的已知DNA或RNA片段(探针)来检测样本中是否有待测的核酸序列。

    生理条件下DNA呈稳定的双链螺旋结构,在体外,当有变性因素存在时(如温度超过65℃、含胺或极端pH时),DNA分子内部的氢键断裂,解离成两条单链DNA,这种现象称为变性。在除去变性因素后,单链DNA能通过碱基互补再结合成稳定的双链螺旋结构,此过程称为复性或退火。

    在复性过程中,若存有与样本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性单链DNA片段或寡核苷酸(一般为17~45个碱基)时,两者可通过互补碱基形成杂交体,即双链DNA分子,这一过程称为杂交。用一段已知的DNA片段加入复性的DNA中,若能够结合成双链分子,说明样本中含有已知的DNA序列。

    核酸分子杂交不仅发生在DNA与DNA之间,也可发生在RNA与RNA、RNA与DNA之间。生成的杂交体分别为 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的双链结构。分子杂交箱


    分子杂交仪的分类

    1. 分子杂交仪的种类较多,根据实验的需求,可以分为6大类:

    1) 用于大容量的分子杂交仪。

    2) 用于 Southern或者 Northern技术点杂交的杂交仪。

    3) 用于小容量的核酸杂交仪。

    4) 微孔板原位杂交仪。

    5) 载玻片原位杂交和平板杂交仪。

    6) Western杂交仪。

    2. 按自动化程度可将分子杂交仪分为三大类:

    1) 普通分子杂交仪:普通分子杂交仪一般为封闭式恒温箱式结构,另加上振荡或旋转式可动机构,控制系统实现温度控制、转速等实验参数的控制和调整。

    2) 半自动分子杂交仪:半自动分子杂交仪不仅能完成普通分子杂交仪在杂交过程中各种参数的控制,还能在人工干预下进行杂交后的其他实验步骤,如孵育、显色等。

    3) 全自动分子杂交仪:全自动分子杂交仪目前主要应用于基因芯片产品,可以实现整个杂交过程的自动化,杂交过程中无需人工参与。基因组DNA与芯片上特异的DNA探针在特定温度条件下进行反应,经过杂交、洗膜、孵育、显色等步骤最终得到检测结果,整个过程都由全自动分子杂交仪自动完成。

     

    操作步骤

    1. 通电预热 

    接通电源线、打开电源开关、恒温室温度显示、应显示室温值,按温度预热20分钟后,恒温室将处于恒温状态。

    2. 安装杂交管

    旋转门锁、打开玻璃门、向下点动旋转、步进开关、使杂交支架旋转到合适的位置,将杂交管卡紧在旋转支架上,关上玻璃门并锁紧。

    3. 启动旋转支架

    向上接通旋转、步进开关、杂交支架转动,杂交反应开始。

    4. 反应结束

    杂交反应结束时,关断旋转、步进开关、旋转门锁、打开玻璃门、取出杂交管。此时若杂交管的位置不合适,可向下点动旋转、步进开关、将旋转支架调整到合适的位置,以便取出杂交管。

    5. 关闭电源开关

    注意事项

    1. 分子杂交仪需要安装在有良好接触的电源插座上。 

    2. 恒温室处于高温状态下装取杂交管时,注意不要烫伤。

    3. 杂交管在装入反应液前一定要清洗干净,装入反应液及反应膜后一定要拧紧瓶盖,以免漏液。

    4. 在进行同位素标记的杂交实验时,必须检查杂交管的密封情况,以免造成污染。一旦发生污染,请及时告知有关部门的使用人员和检修人员,尽可能的减少不必要的伤害。

    5. 由于分子杂交仪设计结构紧凑,密封性要求高,所以在仪器运行中出现故障需要检修时,应切断电源由专业技术人员进行。


    产品特点

    1. 分子杂交仪是现代实验室采用杂交技术的理想设备,可替代塑料杂交袋和水浴摇床,并避免杂交袋破损带来污染危险。

    2. 杂交炉具有微机控温精确,炉内空气循环装置设计独特,升温速度快等特点。

    3. 采用微电脑智能控制,液晶显示三种功能(温度显示、瓶架旋转速度、托盘摆动速度)。

    4. 具有存储记忆功能,可以直观显示系统的运行状况。

    5. 温度控制采用数字PID技术,输岀采用PWM方式,控温精度高,稳定性好,并设有超温保护装置。

    6. 可以同时显示箱内控温温度、滚动式瓶架旋转速度、酶标板或试剂托盘的摆动速度。

    7. 在设定范围内可随意调节所需要的控温温度、瓶架旋转速度、摇床摆动速度。